麦类作物学报 ２ １ ，０ ６ ：０ ８１ ５ ，０ ４ ０ ０ ３ （ ）１ ４０ ２ １ ６ Ｊ ｕｎｌ ｆＴｉｃａ ｒｐ ｏ ｒａ ｏ ｒｉｅｅＣ ｏ ｓ ｔ

二穗短柄草幼胚愈伤组织诱导及高频再生体系的建立


３ ３ ３ 董 芳１， 蔡高磊２， ， 荻１， 张 康振生２， ， 韩德俊１， （ 西北农林科技大学农学院， 陕西杨凌 ７ ２ ０ ； 西北农林科技大学植物保护学院， 陕西杨凌 ７ ２ ０ ； １． １ １ ０ ２． １１０ 陕西省农业与分子生物学重点实验室，陕西杨凌 ７ ２ ０ ） ３． １１０

摘 要：为了建立二穗短柄草高效 再 生 体 系， 二 倍 体 二 穗 短 柄 草 Ａ Ｒ 、 Ｂ ６ 和 六 倍 体 二 穗 短 柄 草 以 Ｂ４Ａ Ｒ 研究了糖类、 染色体组倍性和激素对愈伤组织 诱 导、 化 及 生 根 分 Ａ Ｒ ０ 、 Ｂ １ １、 Ｂ １ ２ 的幼胚为外植体， Ｂ １０ Ａ Ｒ ０ Ａ Ｒ ０ 的影响。结果表明， 二穗短柄草的高效再生体系的建立， 其愈伤组织诱导培 养 基： Ｓ＋２， Ｄ２． ｍ ·Ｌ－１ ＋ Ｌ ４  ５ ｇ 麦芽糖 ３ ·Ｌ－１ ＋ 琼脂 ６． ·Ｌ－１ ； 愈伤组织继代培养基：Ｓ＋２， Ｄ１． ｇ Ｌ－１ ＋６Ｂ ０ｇ ５ｇ Ｌ ４  ０ｍ ·  Ａ０． ｇ Ｌ－１ ＋ ２ｍ · 麦芽糖 ３ ·Ｌ－１ ＋ 琼脂 ６． ·Ｌ－１ ； 愈伤组织分 化 培 养 基： Ｓ＋Ｋ ０ｇ ５ｇ Ｌ Ｔ０． ｍ ·Ｌ－１ ＋６Ｂ ２ ｇ  Ａ０． ｍ ·Ｌ－１ ＋ ５ ｇ 愈 ０ｇ ５ｇ １ ２Ｌ ＡＡ０． ｍ · ６ ｇ Ｃ Ｓ ４ ０． ｇ Ｌ－１ ＋ 麦芽糖 ３ ·Ｌ－１ ＋ 琼 脂 ６． ·Ｌ－１ ； 伤 组 织 生 根 培 养 基：／ Ｓ＋Ｉ ｕ Ｏ ６ｍ · 在含有 ３ ·Ｌ－１ 麦芽糖 Ｌ－１ ＋ 麦芽糖 ２ ·Ｌ－１ ＋ 琼脂 ７． ·Ｌ－１ 。优化了二穗短柄草愈伤组织培养条件， ０ｇ ０ｇ ０ｇ 的培养 基 上， 伤 组 织 出 愈 率 最 高 可 达 ９ ６ ， 含 有 ０． ｍ · Ｌ－１ Ｋ 的 培 养 基 上， 化 率 最 高 为 愈 分 ６．７％ 在 ２ ｇ Ｔ ７ ２ 。并进一步探讨了影响短柄草再生的主要因素。 １．５％ 关键词：二穗短柄草； 幼胚； 愈伤组织； 植株再生 中图分类号：５ ９；３ ６ 文献标识码：Ａ 文章编号：０ ９１ ４ （０ ０ ００ ８０ Ｓ１ Ｓ３ １ ００ １ ２ １ ）６１ ４５

犆犾 狊 狀 狌狋 狀犪 犱犈狋犫 狊 犿 狀 狅 犻犺犳犲 狌狀狔犘犪狋犚 犵狀狉狋 狀 犪 狌 犐 犱犮 狅 狀 狊犪犾 犺 犲狋 犳犎犵狉狇 犲犮 犾狀 犲犲犲犪 狅 犾 犻 犻 犻 犛狊 犿犳狅 犿犿 狋狉 犿 狉狅 犳犅 犪犺 狆 犱狌 犻狋犮 狔 狀 犲 狔狋 狉 犿犐 犪狌犲犈 犫狔狊狅 狉犮 狔 狅犻 犿犇犪犪犺 狅
犇 犖 犪 犵 ， 犃 犪 犻 ３ ， 犎 犖 犻 ， 犃 犌犣 犲犺狀 ２ ３ ， 犃 犲 狌 １ ３ 犗 犌犉 狀 １ 犆 犐犌 狅 犲２ 犣 犃 犌犇 １ 犓 犖 犺狀狊犲 犵 犎 犐犇 狀 犾 犼
（ Ａ ｒｎ ｎ ｏ ｅｅ Ｎ ｒｈ ｅｔＡ＆Ｆ Ｕ ｉｅｓ ｙ Ｙ ｎｌ ｇＳ ａｎｉ １ １ ０； ＰａｔＰｏｅｔ ｎＣｌ ｇ ， １． ｇｏ ａ ｙＣｌ ｇ ， ｏｔ ｗ ｓ ｌ ｎｖｒｉ ， ａ ｇ ｎ ｈａ ｘ ７ ２ ０ ２． ｌｎ ｒｔｃ ｏ ｏ ｅｅ ｔ ｉ ｉ ｌ Ｎ ｒｈ ｅｔＡ＆Ｆ Ｕ ｉｅｓ ｙ Ｙ ｎｌ ｇ Ｓ ａｎｉ １ １ ０，ｈｎ ； Ａ ｒ ｕａａ ａ ｄ Ｍ ｌｃｌｒＢｏｏｉａ ｏｔ ｗ ｓ ｎｖｒｉ ， ａ ｇ ｎ ，ｈａ ｘ ７ ２ ０ Ｃ ｉａ ３． ｇｉ ｌｒｌ ｎ ｏｅｕａ ｉｌｇ ｌ ｔ ｉ ｃ ｃ Ｋ ｙＬ ｂ． ｆＳ ａｎｉ ｒｖｎｅ Ｙ ｎｌ ｇ Ｓ ａｎｉ １ １ ０，ｈｎ ） ｅ ａ ｏ ｈａ ｘ ｐｏｉｃ ， ａ ｇ ｎ ，ｈａ ｘ ７ ２ ０ Ｃ ｉａ ｉ
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犃 狊 犪狋 Ｔ ｅｅ ｅｔ ｆｃｒ ｏ ｏ ｒｅ ｅｏｙ ｅ ｈ ｒ ｏ ｅｏ ｎ ｕｔ ｎｏ ａ ｕ ｎ ｍ ｒｖ ｍ ｎ ｆ 犫狋 犮 ： ｈ ｆ ｃｓｏ ａｂ ｎｓ ｕｃ ，ｃｔｐ ，ｏ ｍ ｎ ｎｉｄ ｃ ｏ ｆｃｌ ｓａ ｄｉ ｐｏ ｅ ｅｔｏ 狉 ｆ ｉ ｌ ｌｎｌ ｒｇ ｎｒｔ ｎｗ ｒ ｉｖｓ ｇｔｄＩ ａｕｅｅ ｂｙ ｓｏ 狉犮 狔 狅 犻 犿犱狊 犮 狔 狀 ｒ ｍｄｐｏｄ ｅ ｉ ｉ 狋 ｐａｔ ｔ ｅ ｅ ｅａ ｏ ｅｅ ｎ ｅｔ ａｅ ．ｍｍ ｔｒ ｍ ｒ ｏ ｆ犅 犪犺 狆 犱狌 犻 犪犺 狅 ｆｏ ｉｌｉ ａｃｓｉｎ Ｂ ６ａ ｄｈ ｘ ｐｏｄａｃｓｉｎ Ｂ １ ２ｗ ｒ ｓｄａ ｅ ｐａｔ ． ｈ ｒｓｌ ｓ ｏ ｅ ｔａ ｔｅ ｃｅｓ ｓＡ Ｒ ｎ ｅ ａｌｉ ｃｅｓ ｓＡ Ｒ ０ ｅｅｕｅ ｓ ｘｌｎｓ Ｔ ｅ ｅｕ ｈ ｗ ｄ ｈｔ ｈ ｏ ｏ ｔ －１ －１ ｍ ｄａ ｏ ａ ｕ ｉｄ ｃ ｏ ａ Ｓ＋２， Ｄ２． ｇ Ｌ ＋ｍ ｌｏｅ３ ｇ·Ｌ ＋ａ ａ ５ｇ·Ｌ－１ ； ｈ ｅｉ ｆｒｃｌ ｓ ｎ ｕｔ ｎｗ ｓＬ ｌ ｉ ４  ５ｍ · ａ ｓ ０ ｔ ｔｅ ｇｒ６． ４  ０ｍ · Ａ ｇ ａ ｓ３ · ｔ ｍ ｄａｆｒ ａ ｕ ｓ ｂ ｕ ｕｅｗ ｓＬ ｅｉ ｏ ｃｌ ｓ ｕ ｃｌ ｒ ａ Ｓ＋２， Ｄ１． ｇ Ｌ－１ ＋６Ｂ ｍ ·Ｌ－１ ＋ｍ ｌｏｅ ０ｇ Ｌ－１ ＋ ａ ａ ｌ ｔ ｇｒ －１ －１ －１ ５ · ６． ｇ Ｌ ； ｈ ｉ ｅｅｔ ｔ ｎｍ ｄａｗ ｓＬ ｔ ｅｄ ｆｒｎｉ ｉ ｆ ａ ｏ ｅｉ ａ Ｓ＋Ｋ Ｔ０． ｇ Ｌ ＋ Ｃ Ｓ ４０． ｇ Ｌ ＋ ｍ ｌｏｅ ０ ２ｍ · ｕ Ｏ ６ｍ · ａ ｓ３ ｔ
－１ －１ ｔ ｒ ｏｉ ｈ ｎ ｅｉ ａ １ ２Ｌ Ｉ ６ｍ · －１ ａ ｓ ０ · －１ ｔ ｇｒ ５ · ｇ·Ｌ ＋ ａ ａ ６． ｇ Ｌ ； ｅ ｏｔ ｇ ｍ ｄａｗ ｓ ／ Ｓ＋ ＡＡ０． ｇ Ｌ ＋ ｍ ｌｏｅ２ ｇ Ｌ ＋ －１ Ｔ ｅ ｏ ｄ ｉｎ ｆ ｉ ｕ ｃｌｕｅｏ 狉犮 狔 狅 犻 犿犱犪犪犺 狅 ａ ｐｉ ｉｅ ｎ ｈ ｔ ｓ ａ ａ ０ｇ Ｌ ． ｈ ｃ ｎｉ ｏ ｓｏ ｔ ｓ ｅ ｕｔｒ ｆ犅 犪犺 狆 犱狌 犻狋犮 狔 狀 ｗ ｓｏｔｍｚｄａ ｄｔｅ ｇｒ７． ·

ａ ｓ． ｈ ｔ ｉｄ ｃ ｏ ｒｑ ｅ ｃ ｏ ｐｉ ａｙｃｌ ａ ９ ６ ｎ ｕｔ ｎｆｅ ｕ ｎｙ ｆ ｒｍ ｒ ａ ｉｗ ｓ ６．７％ ｏ ｔｅｂｓ ｅｉ ｉｃｕｉｇ３ ｇ Ｌ－１ ｍ ｌｏｅ Ｔ ｅ ｉ ｌ ｎ ｈ ａｉ ｃｍ ｄａ ｎｌｄｎ ０ · ·Ｌ－１ ＫＴ． ｈ ａｎｆｃｏｓｗ ｒ ｉ ｒｇ ｎｒｔｄｒｔ ａ １．５％ ｏ ｈ ａｉ ｅｉ ｉｃｕｉｇ０． ｇ ｅ ｅ ｅａｅ ａｅｗ ｓ７ ２ ｎｔ ｅｂｓ ｃｍ ｄａ ｎｌｄｎ ２ Ｔ ｅｍ ｉ ａｔｒ ｅｅ ｎ ｖｓ ｇｔｄｆｒ ｅ ｅ ｅａ ｏ ｆ犅 犪犺 狆 犱狌 犻狋犮 狔 狀． ｅｔ ａｅ ｏ ｒｇ ｎｒｔ ｎｏ 狉犮 狔 狅 犻 犿犱犪犪犺 狅 ｉ ｉ ：狉犮 狔 狅 犻 犿犱犪犪犺 狅 ； ｍｍ ｔｒ ｍ ｒ ｏ ；ａ ｕ ；ｌｎ ｒｇ ｎｒｔ ｎ 犓 狔狑 狉狊 犅 犪犺 狆 犱狌 犻狋犮 狔 狀 Ｉ ａｕｅｅ ｂｙ ｓ Ｃｌ ｓ Ｐａｔ ｅ ｅ ｅａ ｏ 犲 狅犱 ｌ ｉ
２ １５０ ２ ００２ ０  收稿日期：０ ００３ 修回日期： １７０ 基金项目： 国家自然科学基金项目（０ ７ ６ ３ ； ３ ８ １ ０ ） 西北农林科技大学大学生创新性实验计划资助项目（０ ８１０ １ 。 ２ ０７ ） 作者简介： 芳（９ ８－ ） 女， 董 ， 本科生， 专业为植物科学与技术。Ｅ ｍ ｉ：ｅ ｎ ５ １＠ｇ ａ ． ｍ ｍｉ ｃ ｌ ｏ １８  ａ ｄｌ ０ ２ ｌ ｉ 蔡高磊（ 同等贡献）１ ８ ） 男， （９ ２－ ， 硕士研究生， 主要从事植物病理学研究。 通讯作者： 康振生（９ ７－ ） 男， ， 教授， 博士生导师， 主要从事植物病理学研究。 １５ 韩德俊（９ ６－ ） 男， ， 副教授， 博士， 主要从事植物抗病育种基因工程研究。 １６

第 ６ 期 董 芳等： 二穗短柄草幼胚愈伤组织诱导及高频再生体系的建立

·１４ · ０９

犃 犪犻 狅 狊 犺 犾犪 犪 和水 稻（狉  狊 犗狔 拟南芥（狉 犫犱 狆犻 狋 犪犻 狀 ） ） 为模式植物促进了植物生物学的研 作 狕 狊狋狏 犪 犪犻犪
然而它们作为 模 式 植 物 不 适 用 于 温 带 谷 类 植 究，
１３ 物和禾草类植物的研究 ［ ］。近几年来， 二穗 短柄

种子， 用 ７ 先 ５％ （／ ） 酒 精 消 毒 ４ ， ２％ ｖｖ 的 ０ｓ 用 （／ ） 的次氯酸钠处理 ４ ｍｎ， 用 无 菌 水 清 洗 ３ 再 ｗｖ ｉ 次。 １． 愈伤组织的诱导 ３ 用镊子挑取短 柄 草 种 子 中 的 幼 胚， 入 基 本 放
［ ］ 培养基 Ｌ ［４］， Ｓ１ 加入 ２． ｇ Ｌ－１２， Ｄ １ ， ５ｇ ５ｍ · ４ １ ６．  ·Ｌ－１ 琼脂， 添加不同 种 类 的 碳 源 ３ ｇ·Ｌ－１ ， Ｈ ０ ｐ

草 （ 狉犮 狔 狅 犻 犿 犱犪犪犺 狅 ） 为 其 诸 多 优 犅 犪犺 狆 犱狌 犻狋犮 狔 狀 因 点， 已成为禾本科 中 除 水 稻 之 外 的 另 一 种 模 式 植
５１ 人们 对 其 已 进 行 了 深 入 系 统 的 研 究 ［２］。 系 物，

统发生学研究证 明， 穗 短 柄 草 与 小 麦 同 属 于 早 二 并与小麦一样具有二倍体、 四倍体和六 熟禾亚科， 倍体， 且造成麦类作物减产的白粉病、 叶锈病和条 锈病均可以感染 某 些 短 柄 草 生 态 型， 明 它 是 研 说 究小麦基因组和改良小麦等禾谷类作物品质最为 理想的模式植物。 作为功能基 因 组 研 究 的 模 式 植 物， 效 再 生 高 体系对建 立 分 子 遗 传 模 式 系 统 至 关 重 要
［１ １］ ［３ １］

８ 于 ４±２℃ 暗 培 养 下 诱 导 愈 伤 组 织，０ｄ 后 ３ ５． ， ２ 统计愈伤组织的诱导率。 １． 胚性愈伤组织的形成 ４ Ｌ 继代培养基含 ２， Ｄ（ 、 ０ 或 ２． ｍ · Ｓ ４ ０ １．  ０ ｇ ，５ · 补加 Ｌ－１）６． ｇ Ｌ－１ 琼脂和 ３ ｇ·Ｌ－１ 麦芽糖， ０ 不同浓 度 ６Ｂ ， Ｈ ５． 。 于 ２ Ａｐ ５±２℃ 暗 培 养，０ ２ ８ ｄ 后统计愈伤组织的诱导率。 １． 植株再生 ５ 将胚性愈伤组织转 移 到 含 ０． ｍ ·Ｌ－１Ｃ  ６ ｇ ｕ 并 Ｓ ４ 、０ｇ·Ｌ－１ 麦 芽 糖 和 ６． ｇ·Ｌ－１ 琼 脂， 分 Ｏ ３ ５ 别补加不同浓度 ＫＴ、 Ｂ 的 Ｌ 再生 培养 基上， ６ Ａ  Ｓ 以不加 任 何 植 物 外 源 激 素 作 为 对 照， Ｈ 值 为 ｐ ５． 。两星期后统计分化植株。将分化高 ３ｃ 的 ８ ｍ 短柄草幼苗接入生根培养 基， 根 培 养 基 为 含 ２ 生 ０ · －１ 分 ０ · －１ ｇ Ｌ 麦芽糖和 ７． ｇ Ｌ 琼 脂、 别补 加不同 浓度 Ｉ ／ Ｓ 两 ＡＡ 的 １ ２Ｌ 培 养 基， 星 期 后 统 计 植 株 生根 情 况。 分 化 和 生 根 光 照 ８ μ ｏ · ｍ－２ · ０ ｍｌ －１ －１ 培 ｓ ，６ｈ·ｄ ； 养 温 度 ２ １ ５±２℃ 。当 植 株 达 到 移出并洗净根 上的 培养 基， 栽 到 含 移 １ ｍ 高时， ０ｃ 有无菌土和基质（ ） １∶１ 的土壤中生长直到成熟。

。在

短柄草组织培养研究方面，ａｌｋ 等 首次 利用 Ｂ ｂａ 短柄草 ３ 个二倍体基因型 Ｂ ０ 、３ ３ 和 Ｂ ７ 的 ２０ Ｂ ７ ３７ 成熟胚为材料来诱导愈伤组织， 并分析了培养基、 ２， Ｄ、 Ｂ 、 ４ ６ Ａ ＮＡＡ 对 短 柄 草 再 生 的 影 响； ｏ ｅ   Ｖ ｇｌ ４ 等 ［ ］利用成熟胚 来 诱 导 胚 性 愈 伤 组 织， 现 其 绿 发 芽分 化 率 为 ０～９ 。 Ｄ ａ ｅ 等 以 短 柄 草 ５％ ｒｐｒ 在 Ｓ Ａ Ｒ 的幼胚为材料， Ｌ 培养基上胚性愈伤诱 Ｂ１ 导率达 ４ ； ｈｉｔ ｎｅ 等 ［２］比 较 短 柄 草 二 倍 ５％ Ｃ ｒ ｉ ｓｎ １ ｓａ 体和四倍体基因 型 的 幼 胚 培 养， 现 愈 龄 对 短 柄 发 草再生影响极大， ３～６ 周愈龄时 愈 伤 组 织 再 生 率 最高可达 １ ０％ ， ８ 周 愈 龄 后 愈 伤 组 织 再 生 率 而 ０ 下降到 ８ 。 ０％ 目前国外对 短 柄 草 再 生 研 究 不 够 系 统， 国 而 内对其再生方面未见研究报道。本试验选取二倍 体和六倍体短柄草， 系统研究糖类、 染色体组倍性 和激素对愈伤组织诱导、 分化及生根的影响， 以及 优化短柄草再生 过 程 中 的 主 要 影 响 因 素， 立 了 建 二穗短柄草高效 再 生 体 系， 的 是 为 小 麦 等 禾 谷 目 遗 类作物的品质改 良、 传 转 化 及 基 因 功 能 验 证 奠 定理论基础。
［］ ５

２ 结果与分析
２． 不同碳源 对 短 柄 草 幼 胚 愈 伤 组 织 形 成 的 影 １ 响 短柄草 幼 胚 接 种 ７ｄ 后 开 始 形 成 愈 伤 组 织， 湿 乳 ２ ０ｄ 时形 成 大 量 松 散、 润、 白 色 的 愈 伤 组 织 （ １ ） 然而， 不 同 碳 源 下 愈 伤 组 织 的 出 愈 率 图 Ａ ， 在 不同（ １ 。 表 ） 碳 从表 １ 可以 看 出， 源 种 类 对 愈 伤 组 织 诱 导 有一定影响， 柄 草 愈 伤 组 织 在 只 含 有 麦 芽 糖 的 短 培养基下 出 愈 率 最 高 达 ９ ７％ （ Ｂ ６） 在 只 含 ６． Ａ Ｒ ， 有 山 梨 醇 的 培 养 基 下 出 愈 率 最 低 为 ４ ０％ ０． （ Ｂ １ ２ 。 在 蔗 糖、 芽 糖 和 蔗 糖 与 麦 芽 糖 组 麦 Ａ Ｒ０ ） 合的培养基上愈伤组织 诱 导 率 都 在 ７ 以 上； 而 ５％ 在含有山梨醇、 蔗糖与山梨醇组合、 麦芽糖与山梨 醇组合的培 养 基 上 愈 伤 组 织 诱 导 率 都 在 ５ ５％ 以

１ 材料与方法
１． 试验材料 １ 二倍体二 穗 短 柄 草 Ａ Ｒ 和 Ａ Ｒ ， 倍 体 Ｂ４ Ｂ６ 六 二穗 短 柄 草 Ａ Ｒ ０ 、 Ｂ １ １ 和 Ａ Ｒ ０ ， 子 Ｂ １０ Ａ Ｒ ０ Ｂ １２ 种 由美国普渡大学许金荣教授提供。 １． 材料的消毒预处理 ２ 选取 开 花 后 １ ４ｄ 的 二 倍 体 和 六 倍 体 短 柄 草

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麦 类 作 物 学 报 第 ３ 卷 ０

下， 说明山梨醇不 适 合 作 为 短 柄 草 组 培 基 中 的 碳 源。另外， Ｂ ６ 比 Ａ Ｒ ０ 出愈率高， 可能 是由 Ａ Ｒ Ｂ １２

于染色体组倍性不同引起的。

表 １ 不同碳源下愈伤组织的诱导率 犜犫 犪犾 犲１ 狀 狌狋 狀犳犲 狌狀狔狅 犻 犲犲狋 犪犫 狀狊狌犮 狀狆犻 犪狔犮犾 狊 犐 犱犮 狅 狉狇犲犮 犳犱 犳狉狀 犮狉狅 狅狉犲狅 狉犿 狉 犪 狌 犻 犳 犾
处理 Ｔ ｅｔ ｅｔ ｒａ ｍ ｎ １ ２ ３ ４ ５ ６ 蔗糖 Ｓ ｃｏｅ ｕｒｓ 麦芽糖 Ｍ ｌｏｅ ａ ｓ ｔ 山梨醇 Ｓ ｒｉ ｌ ｏｂ ｏ ｔ 蔗糖（５ｇ ＋ 麦芽糖（５ｇ Ｓ ｃｏｅ１ ） Ｍ ｌｏｅ１ ） １ ） １ ） ｕｒｓ （５ｇ ＋ ａ ｓ （５ｇ ｔ 蔗糖（５ｇ ＋ 山梨醇（５ｇ Ｓ ｃｏｅ１ ） Ｓ ｒｉ ｌ（５ｇ １ ） １ ） ｕｒｓ （５ｇ ＋ ｏｂ ｏ １ ） ｔ 麦芽糖（５ｇ ＋ 山梨醇（５ｇ Ｍ ｌｏｅ１ ） Ｓ ｒｉ ｌ（５ｇ １ ） １ ） ａ ｓ （５ｇ ＋ ｏｂ ｏ １ ） ｔ ｔ 碳源种类 Ｃ ｒ ｏ ｏ ｒｅ ａｂ ｎｓ ｕｃ 出愈率／％ ｅｃｎａ ｅｏ ｒｍ ｒ ａｉ Ｐｒｅｔｇ ｆｐｉ ａｙｃｌ ｌ Ａ Ｒ Ｂ６ ８ ８ａ ６．９ ｂ ９ ６ａ ６．７ ４ ２ｃ ９．４ ８ ４ｂ ０．８ ５ ８ｃ ２．３ ５ ３ｃ ３．３ Ａ Ｒ０ Ｂ １２ ８ ８ａ ３．１ ９ ３ａ ３．３ ４ ０ｂ ０．０ ７ １ａ ７．４ ４ ０ｂ ９．５ ４ ２ｂ ４．９

同一列数字后的不同小写字母表示差异显著。下同。 Ｄｆ ｒｎ ｓ ａ ｌｔｅｓ ｎｔｅｓ ｍ ｏｕ ｎｍ ａ ｉ ｅｅ ｃ ｉｎ ｉａｔ ｔ ０ ｅｅ ， ｓｅｔ ｅｙ Ｔ ｅｓ ｍ ｒ ｓ ｎｔｂｅ２． ｉ ｅｅｔ ｍ ｌ ｅｔｒ ｉ ｈ ａ ｅｃｌ ｍ ｅｎｄ ｆｒｎｅｓ ｉｃｎ ａ ０．５ｌｖｌ ｒ ｐｃ ｖｌ ． ｈ ａ ｅａｅａ ｉ ａｌ ｆ ｌ ｆ ｓ ｅ ｉ ｇｆ

２． 不同浓度激 素 组 合 对 短 柄 草 幼 胚 愈 伤 组 织 ２ 形成的影响 来源于 Ｌ Ｓ＋ 麦芽糖 ３ ｇ·Ｌ ＋ 琼 脂 ６． ｇ ０ ５ ·Ｌ 形成 的 湿 润 松 散 的 幼 胚 愈 伤 组 织， 继 代 在
－１ －１

代培养基中形成的所有胚性愈伤组织转移到含有 植物 外 源 激 素 的 再 生 培 养 基 上， 后 在 胚 性 愈 ７ｄ 伤组织上就有绿芽出现（ １ 和图 １ ） 图 Ｃ Ｄ 。胚性愈 伤组织在含有 Ｋ 、 Ｂ 的 再 生 培 养 基 上 都 能 分 Ｔ６ Ａ  图 ） 然而 再 生 频 率 有 所 差 别。 化出绿芽（ ２ 和图 ３ ， 其中， 最佳条件 是 添 加 ０． ｍ ·Ｌ－１ＫＴ 的 再 生 ２ ｇ 培养 基， 芽 分 化 率 最 高 （ Ｂ ６ 为 ６ １ ， 绿 Ａ Ｒ ４．２％ Ａ Ｒ１ ２ 为 ７ ２ ） Ｂ ０ １．５％ 。在 ０． ５～１． ｍ ·Ｌ－１６ ０ ｇ  绿芽分化较快， 整 体 褐 化 现 象 较 为 严 重， 但 且 Ｂ Ａ 浓度越高褐 化 越 严 重， 明 ６Ｂ 浓 度 过 高 是 导 说 Ａ 致褐化的直接原因。 ２． 犐 犃 对短柄草生根的影响 ４ 犃 将Ｌ Ｓ＋Ｋ Ｔ０． ｍ ·Ｌ－１ ＋６Ｂ ２ ｇ  Ａ０． ｍ · ５ ｇ Ｌ－１ ＋ Ｃ Ｓ ４ ０． ｍ ·Ｌ－１ ＋ 麦 芽 糖 ３ ｇ·Ｌ－１ ｕＯ ６ ｇ ０ －１ ＋ 琼脂 ６． ｇ·Ｌ 分 化 培 养 基 中 有 绿 芽 分 化 的 ５ 胚性愈伤组织 转 移 到 含 有 不 同 浓 度 Ｉ ＡＡ 的 生 根 培养基上，５ｄ 后白 色 的 根 就 可 以 铺 满 整 个 培 养 １ 基（ １ ） 图 Ｅ 。从图 ４ 可以看 出， Ｉ 在 ＡＡ 诱 导 下， 含 有绿芽的胚性愈 伤 组 织 均 能 生 根， 生 根 的 多 少 但 不同， 其中在 ０． ｇ Ｌ－１Ｉ ６ｍ · ＡＡ 下生根多而快。 ２． 二倍体和 六 倍 体 短 柄 草 幼 胚 愈 伤 组 织 的 诱 ５ 导和植株再生 从再生的短柄草中挑选长势较好的短柄草再 生植 株， 栽 到 壤 土 中， 在 温 室 下 培 养， 到 成 移 并 直 熟（ １ ） 移 栽 的 所 有 植 株 均 能 成 活。 用 优 化 图 Ｆ。 的条件诱导二倍体和六倍体共五种不同短柄草生 态型的幼胚， 植株再生频率从 ５ ５ 到 ６ ３ ３．１％ ０．８％ （ ３， 表 ） 不同生态型的差异不大。

培养 基 上 培 养 １ 生 致 黄 ０ｄ 后， 成 干 燥、 密、 白 色、 颗粒状的胚性 愈 伤 组 织（ １ ） 从 表 ２（ 个 培 图 Ｂ 。 每 设 取 养皿 中 含 ２ 块 愈 伤 组 织， 三 个 重 复， 诱 导 为 ０ 胚性愈伤组织 数 的 平 均 值） 可 以 看 出， ０ ｍ 中 １． ｇ ·Ｌ ２， Ｄ 与 ０． ｍ ·Ｌ ６Ｂ 组 合 对 诱 导 ４  ２ ｇ Ａ 胚性愈伤组织效果最好， 而不添加任何植物生长调
－１ －１

胚性愈伤组织不能形成， 证明植物生长调节 节剂时， 剂对胚性愈伤组织诱导起着不可或缺的作用。
表 ２ 植物生长调节剂对胚性愈伤组织形成的影响 犜犫 犪犾 犲２ 犈犳犮 犳狆犪狋 狉 狑犺狉犵犾狋狉狅 犳 狋 犲 狊狅 犾狀 犵狅 狋 犲狌犪狅 狀 犳狉 犻犵犲 犫狔犵狀犮犮犾 狊 狅 犿狀 犿 狉狅犲犻 犪 狌 犾
植物激素和浓度（ｍ ·Ｌ－１） ｇ Ｐａｔｇｏ ｔ ｅ ｕａｏ ｌｎ ｒ ｗ ｈｒｇｌｔｒ ａ ｄｃ ｎｅｔａ ｏ ｎ ｏ ｃｎｒｔ ｎ ｉ ２， Ｄ ４  ６Ｂ Ａ ０ ０ ０． ２ ０． ５ ０ １． ０ ０． ２ ０． ５ ０ ２． ０ ０． ２ ０． ５ 胚性愈伤组织数平均值 Ａ ｅａ ｅｎ ｍ ｅ ｆ ｖｒｇ ｕ ｂｒｏ ｅ ｂｙ ｇ ｎｃｃｌ ｓ ｍ ｒｏ ｅｉ ａ ｕ ｌ Ａ Ｒ Ｂ６ ０ ｆ ３．ｄ ５ｅ ２．ｅ ０ｆ １ ５ ０．ｂ １ ０ ４．ａ ６．ｃ ５ １ ０ｂ ３．ａ １ ５ｂ １．ａ ５．ｃ ０ｄ Ａ Ｒ０ Ｂ １２ ０ ｄ １．ｄ ５ １．ｄ ０ ７．ｂ ５ １ ０ ０．ａ ４．ｃ ５ ６．ｂ ５ｃ ９．ａ ５ ５．ｂ ５ｃ

２． ３ 犓 和 ６犅 对短柄草再生特性的影响 犜 犃 将Ｌ Ｓ＋２， Ｄ１． ｍ ·Ｌ ＋６Ｂ ０． ｍ ４  ０ ｇ Ａ ２ ｇ －１ ·Ｌ ＋ 麦芽糖 ３ ｇ·Ｌ ＋ 琼 脂 ６． ｇ·Ｌ－１ 继 ０ ５
－１ －１

第 ６ 期 董 芳等： 二穗短柄草幼胚愈伤组织诱导及高频再生体系的建立

·１５ · ０１

二穗短柄草幼胚诱导出的愈伤组织； ： Ｂ 继代后形成的胚性愈伤组织； ： Ｃ 胚性愈伤组织出现绿芽； ： Ｄ 愈伤组织分化； ： 柄 草 植 株 Ｅ 短 Ａ： 生根； ： Ｆ 再生植株 Ａ：ａ ｕ ｆｅ ｆ ｓ ｒｕ ｄｏ 犅 犪犺 狆 犱狌 犻狋犮 狔 狀； ： ｍ ｒｏ ｅｉ ｃｌ ｓ ｆｅ ｓｖｒｌ ｏ ｎ ｓ Ｃ： ｒｅ ｕ ｓｏ ａ ｕ ； ：ｉ Ｃｌ ｓａ ｒ ｉ ｔ ｏ ｎ ｆ 狉犮 狔 狅 犻 犿犇 犪犪犺 狅 Ｂ Ｅ ｂｙ ｇ ｎ ａ ｕ ａ ｒ ｅｅａ ｒｕ ｄ ； Ｇ ｅｎｂ ｄ ｎｃｌ ｓ Ｄ Ｄｆ ｌ ｔ ｒ ｃ ｌ ｔ ｌ  ｆｒｎｉｔ ｎｏ ｃｌ ｓ Ｅ： ｏｔ ｆ ａ ｕ ； ： ｅｅ ｅａ ｏ ｌｎｓ ｅｅｔ ｉ ｆ ａ ｕ ； Ｒ ｏｓｏ ｃｌ ｓ Ｆ Ｒ ｇ ｎｒｔ ｎｐａｔ ａｏ ｌ ｌ ｉ

图 １ 二穗短柄草以幼胚为外植体的植株再生过程 犉犵 １ 犘犪狋 犲犲犲犪 狅 狋狆 犳犅 犪犺 狆 犱狌 犻狋犮 狔 狀犳狉 犿犿 狋狉 犿 狉狅犪 犲狆犪狋 犻． 犾狀 狉犵狀狉狋 狀狊 狊狅 狉犮 狔 狅犻 犿犇犪犪犺 狅 狅 犻 犪狌犲犲 犫狔 狊 狓犾狀狊 犻 犲

图 ２ 不同 犓 浓度下 犃 犚 和 犃 犚 ０ 再生率 犜 犅６ 犅 １２ 犉犵 ２ 犚 犵狀狉狋 狀狉狋 犳犃 犚 狀 犅 １ ２ 犻． 犲犲犲犪 狅 犪犲 犻 狊狅 犅 ６犪 犱犃 犚 ０ 犻 犻 犲犲狋犓 狅 犮狀狉狋 狀 狀犱 犳狉狀 犜犮狀犲狋犪 狅狊 犳 犻

图 ３ 不同 ６犅 浓度下 犃 犚 和 犃 犚 ０ 再生率 犃 犅６ 犅 １２ 犉犵３ 犚 犵狀狉狋 狀狉狋 犳犃 犚 狀 犅 １ ２ 犻． 犲犲犲犪 狅 犪犲 犻 狊狅 犅 ６犪 犱犃 犚 ０ 犻 犻 犲犲狋  犃犮狀犲狋犪 狅狊 狀犱 犳狉狀 ６犅 狅 犮狀狉狋 狀 犳 犻

表 ３ 二倍体和六倍体短柄草幼胚愈伤组织的诱导和植株再生 犜犫 犪犾 犲３ 犆犾 狊 狀 狌狋 狀犪 犱狆犪狋 犲犲犲犪 狅 狉 犿犻 犪狌犲犲 犫狔 犳犱狆狅犱 犪 狌 犻犱犮 狅 狀 犾狀 狉犵狀狉狋 狀犳狅 犿犿 狋狉 犿 狉狊狅 犻犾犻 犾 犻 犻

狋 犪 犱犺狓 狆狅犱狅 犅 犪犺 狆 犱狌 犻 犪犺 狅 狀 犲犪犾犻 犳 狉犮 狔 狅犻 犿犱狊 犮 狔 狀
生态型 Ｅ ｏｙ ｅ ｃｔｐ Ａ Ｒ Ｂ４ Ａ Ｒ Ｂ６ Ａ Ｒ０ Ｂ １０ Ａ Ｒ０ Ｂ １１ Ａ Ｒ０ Ｂ １２ 染色体组倍性 Ｄｆ ｒｎ ｉ ｅｅｔ ｆ ｃｒ ｍ ｓ ｍ ｅｓ ｈｏ ｏｏ ｅｓｔ ２ Ｘ ２ Ｘ ６ Ｘ ６ Ｘ ６ Ｘ 接种数／枚 Ｎ ｍｅ ｆ ｕ ｂｒｏ ｅ ｐａｔ ｉｏｕａｅ ｘｌｎｓ ｎ ｃｌｔｄ １４ １ １６ ０ １０ １ １４ １ １７ １ 愈伤组织数 （ 诱导率） Ｎ ｍｅ ｆ ｕ ｂｒｏ ｒｍ ｒ ａｉ ｎ ｕｅ ｌ ｐｉ ａｙｃｌ ｉｄ ｃｄ ９ （３．３％ ） ５８ ３ ９ （２．５％ ） ８９ ４ ８ （９．９％ ） ７７ ０ １０８ ７ ） ０ （７．２％ ９ （２．１％ ） ７８ ９ 胚性愈伤组织数 （ 诱导率） Ｎ ｍｅ ｆ ｕ ｂｒｏ ｅ ｂｙ ｇ ｎ ａｉ ｍ ｒｏ ｅｉ ｌ ｃｃ ｌ ８ （０．８％ ） ０７ １ ８ （８．０％ ） ３７ ３ ７ （１．２％ ） ９７ ８ ８ （６．２％ ） ７７ ３ ８ （８．８％ ） ０６ ３ 绿芽分化数（ 分化率） Ｎ ｍ ｅ ｆ ａｉ ｕ ｂｒｏ ｃｌ ｌ ｒｄ ｃ ｎ ｐｏ ｕｉｇ ｒｅ ｈ ｏ ｇｅｎｓ ｏｔ ６ （３．１％ ） １５ ５ ６ （０．８％ ） ４６ ３ ６ （７．７％ ） ３５ ２ ６ （９．５％ ） ８５ ６ ６ （５．６％ ） ５５ ５

·１５ · ０２

麦 类 作 物 学 报 第 ３ 卷 ０

态型 均 能 生 根， ２ ｄ 后 它 们 之 间 无 显 著 差 异。 在 ５ 本试验用Ｉ 结果 ＡＡ 诱导 Ａ Ｒ 和 Ａ Ｒ ０ 生根， Ｂ６ Ｂ １２ 表明， ０． ｇ Ｌ－１ ＡＡ 下， Ｂ ６ 和 Ａ Ｒ ０ 在 ６ｍ · Ｉ Ａ Ｒ Ｂ １２ 生根较快，５ｄ 时平均生根数在 ４ 条以上。 １ 通过以上各种 培 养 条 件 的 优 化， 以 得 到 二 可 穗短柄草幼胚高效再生体系组成为愈伤组织诱导 培养 基： Ｓ＋２， ２． ｍ · Ｌ－１ ＋ 麦 芽 糖 ３ Ｌ ４Ｄ ５ ｇ ０ · －１ ５ · －１ 愈伤 组织 出愈 率最高 ｇ Ｌ ＋ 琼脂 ６． ｇ Ｌ ， 为９ ６ ； ６．７％ 愈伤组织继代培养基： Ｓ＋２， Ｄ ０ Ｌ ４ １．  Ａ ２ ｇ ０ ｍ · Ｌ－１ ＋６Ｂ ０． ｍ · Ｌ－１ ＋ 麦 芽 糖 ３ ｇ· ｇ －１ －１ 愈伤组织分化培养基：Ｓ Ｌ ＋ 琼脂 ６． ｇ Ｌ ； ５ · Ｌ Ａ ５ ｇ ｕ ＋ＫＴ １ ｍ ·Ｌ－１ ＋ ６Ｂ ０． ｍ ·Ｌ－１ ＋Ｃ  ０． ｇ －１ －１ Ｓ ４ ０． ｇ Ｌ ＋ 麦芽糖 ３ ｇ Ｌ ＋ 琼脂 ６． Ｏ ６ｍ · ０ · ５ · －１ 愈伤组织分化率最高 为 ７ ２ ； 伤组 １．５％ 愈 ｇ Ｌ ， 织生根培养基：／ Ｌ Ｉ ０． ｇ·Ｌ－１ ＋ 麦芽 １ ２ Ｓ＋ ＡＡ ６ｍ 糖 ２ ｇ Ｌ－１ ＋ 琼脂 ７． ｇ Ｌ－１ 。 ０ · ０ ·

图 ４ 不同 犐 犃 浓度下 犃 犚 和 犃 犚 ０ 的生根数 犃 犅６ 犅 １２ 犉犵 ４ 犖 犿 犲 犳 狅狋狆狉狆犪狋 犳犃 犚 狀 犅 １ ２ 犻． 狌 犫狉狅 狉狅 犲 犾狀 狅 犅 ６犪 犱犃 犚 ０ 狀犱 犳狉狀 犐 犃犮狀犲狋犪 狅狊 犳 犻 犻 犻 犲犲狋 犃 狅 犮狀狉狋 狀

３ 讨 论
本试验研究了不同碳源对短柄草幼胚愈伤组 织的诱导， 发现同一浓度下麦芽糖效果最好， 愈伤 组织出愈率可达 ９ ６ 。可 能 是 由 于 麦 芽 糖 作 ６．７％ 使 为渗透剂分解速 度 相 对 蔗 糖 等 其 它 糖 类 更 慢，
１ 培养物保持相对稳定的渗透压环境 ［５］。

参考文献：
［ ］ ｅｏ １ Ｄ ｖｓＫＭ，ｅｌｓ ， ａ ａ ｕａＹ， 犪 ． ｒｂｄ ｐｉ ｒ ｅ ｗｌ Ｂａ Ｊ Ｎ ｇ ｍ ｒ ｅ 犲 犾 Ａ ａｉｏ ｓ  ｃ ：ｉ 狋 ｓｉ ｌ ｃｌ ｅｒ ｙａ ｏ ｇ ｎ ｒｄ ｔ ｎａｒｓ ｈ ｕｉｏ ｍ ｎ ｃｔ ｏ ｎａｉ ｌ ｗ ｅ ｅｐｅｉ ｉ ｃｏｓｔｅｅ ｄ ｔ ｏ ｏｏ ｉ ｔ ｌ ｃｏ ｃ ｄｖｄ ［］ Ｇ ｎ ｍ ｅｅｒｈ，９ ９， ：２２ ｉｉｅＪ ？ ｅ ｏ ｅＲ ｓａｃ １ ９ ９ ８ ５８ ９． ［ ］Ｔｋ ｏ ｏ Ｐ，ａ Ｍ ｇ ｅ Ｊ Ｎ ｋｊｍ ２ ｉｈ ｎ ｖＡ Ｓ ｎ ｉｕｌＰ ， ａ ａ ａＹ， 犪 ． ｏ ｎａｉｙ ｉ 犲 犾 Ｃｌ ｅｒ 狋 ｉ ｔ ａ ｄ ｔ ｅ ｃｐ ｏ ｓ ｎｏｔ ｏｏ ｏ ｓ ｄ ｅｉｎ ｏ ａ ｅ ｎ ｓｒ ｎ ｉ ｘｅｔ ｎ ｉ ｒｈｌｇ ｕ ａ ｈｒｇｏ ｓ ｆｍ ｉ ａ ｄ ｏ ｓ ｉ ｚ ｈ ｍ Ｊ ． ｒｃｅｉｇ ｏ ｔｅＮ ｔ ｎｌＡ ａ ｅ ｙｏ Ｓｉ ｃｓ ｆ ｉ ｅ ｇ ｕ ［］ Ｐｏｅｄｎ ｓ ｆ ｈ ａ ｏ ａ ｃｄ ｍ ｆ ｃ ｎｅ ０ Ｕ Ａ ，９ ９，６：４ ９７ １ Ｓ １ ９ ９ ７ ０４ ４． ［ ］Ｋ ｌ ｒＢ，ｅｉｅ ３ ｅｅ ｌ Ｆ ｕｌｔＣ．ｏ ｎａｉｙａ ｄｇ ｎ ｅ ｓ ｙ ｎｇａｓｇ ｌ Ｃｌ ｅｒ ｉ ｔ ｎ ｅ ｅｄ ｎｉ ｉ ｒｓ ｅ ｔ ｎ ｍ ｓＪ ． ｒｎ ｓ ｎＰａｔＳｉｎｅ２ ０ ， ：４５ ｏ ｅ ［］ Ｔ ｅ ｄ ｉ ｌｎ ｃ ｃ ，０ ０ ５ ２ ６２ １． ｅ ［ ］Ｖ ｇｌ ， ａｖｎＤＦ，ｅ ｎ ４ ｏ ｅ ＪＰ Ｇ ｒｉ Ｌ ｏ ｇＯ Ｍ， 犪 ． ｇｏ ａｔｒ ｍ ｍ  犲 犾 Ａ ｒｂｃｅｉ  ｅ 狋 ｕ ｄ ｔｄｔａ ｓｏ ｍ ｔ ｎａ ｄ ｎ ｒｄ ｉｅｄｖｌｐ ｅｔ ｎ ｈ ｏ ｉ ｅ ｒｎｆｒ ａ ｏ ｎ ｉｂｅ ｌ ａ ｉ ｎ ｅｅｏ ｍ ｎ ｉ ｔｅｍ ｄ ｅ ｇａｓＢａｈ ｐ ｄｕ ｄ ｔｃ ｙ ｎ［ ］ ＰａｔＣｌ ｉｓ ｅａ ｄ ｌＴｓｕ ｎ ｌ ｒｓ ｒｃ ｙ ｏｉ ｍ ｉ ａｈ ｏ Ｊ ．ｌｎ ｅ ｓ Ｏ ｇ ｎＣ ｌｕｅ２ ０ ，４：９１ ｒａ ｕ ｒ ，０ ６ ８ １ ９２ １． ｔ ［ ］ ｒｐｒＪ Ｍ ｒＬ Ａ Ｊ Ｊｎｉｓ Ｇ， 犾．Ｂａｈ ｐ ｄｕ ｄ  ，ｅ ｋｎ ５ Ｄａ ｅ ， ｕ 犲 狋犪 ｒｃ ｙ ｏｉ ｍ ｉ ｓ ｔｃ ｙ ｎ． ｅ ｍ ｄｌ ｙｔ ｍｆｒ ｕ ｃ ｏ ａ ｇ ｎ ｍｃ ｉ ｒｓ ａｈ ｏ Ａｎ ｗ ｏ ｅ ｓｓｅ ｏ ｆ ｎｔ ｎｌ ｅ ｏ ｉｓ ｎｇａ ｉ ｏ ｓｓＪ ． ｌｎ ｈ ｓ ｌｇ ，０ １，２ ：５ ９１ ５ ｅ ［］ ＰａｔＰ ｙｉ ｏ ｙ ２ ０ １ ７ １ ３５ ５． ［ ］ ｏｔ ｄ ｅＡ Ｐ Ｍ，ｈｌ ｙＧ， ｍｔ ６ Ｒ ｕｌ ｇ ｅ Ｓｅｅ ｌ Ｓ ｉｈＪＶ， 犪 ．Ｍ ｇ ａ ｏｔｅ 犲 犾 狋 ａ ｎ ｐｒｈ ｒ ａｉｔｒｃ ｏ ｓ ｉｈｔｅ ｏ ｅ ｒｓ ｒｃ ｙ ｏｉ ｍ ｉ ｓ ｉ ｓ ｇｉｅ ｎｅａｔ ｎ ｗｔ ｈ ｍ ｄｌｇａｓ Ｂａｈ ｐ ｄｕ ｄ  ｔｃ ｙ ｎｃ ｓｌ ｅｅ ｂｅ ｈ ｓ ｉｈｒ ｅ （狉 狕 狊狋狏 ）［ ］ ａｈ ｏ ｌ ｅｙｒｓ ｍ ｌ ｔ ｏｅｗｔ ｉ 犗 狔 犪 犪犻犪 Ｊ ． ｏ ｃ Ｍ ｌｃｌｒＰａｔＰｔ ｏｏ ｙ ，０ ４， ：５６ ｏｅｕａ ｌｎ ａｈｌｇ ２ ０ ５ ２ ３２ ５． ［ ］ ｎｉｓＧ， ｕ ，ａｌｋＰ犲 犾 Ｐｏｐｃｓ ｏ ｆ ｎｔ ｎ ７ Ｊ ｋｎ ｅ Ｍ ｒＬＡＪ Ｂ ｂａ ， 犪 ． ｒｓｅｔ ｆｒ ｕ ｃ ｏ  狋 ｉ ａ ｅ ｏ ｉｓ ｎａｎ ｗ ｍ ｄｌ ｒｓ ［ ］ ｎ：ｅ ｔｒＤ （ｄ Ｐａｔ ｌｇ ｎ ｍｃ ｉ ｅ ｏ ｅ ｇａｓ Ｍ ． Ｌｉ ｅ Ｉ ｓ ｅ ） ｌｎ ｆ ｎｔ ｎｌ ｇ ｎ ｍｃ ． Ｈ ｗ ｒｈ Ｐｅｓ Ｂｎ ｈ ｍ ｔｎ，ＮＹ， ｕ ｃ ｏ ａ ｅ ｏ ｉｓ ｉ ａ ｏｔ ｒｓ ， ｉｇ ａ ｐｏ ２ ０ ，０２ ０ ５ ３ ５３ ５． ［ ］Ｈ ｓｅｏ Ｒ， ｒｐｒＪ ＪｎｉｓＧ． ａｉｇｔｅｃｔｔｘ ｎ ｍｃ ８ ａｔｒ ｋ Ｄ ａ ｅ ，ｅ ｋｎ Ｌ ｙｎ ｈ ｙｏａ ｏ ｏ ｉ ｆｕ ｄｔ ｎ ｆａｎ ｗ ｍ ｄｌｇａｓ 犅 犪犺 狆 犱狌 犻 犪犺 狅 ｏ ｎ ａ ｏ ｓｏ ｉ ｅ ｏ ｅ ｒｓ ，狉犮 狔 狅 犻 犿犱狊 犮 狔 狀 狋 （ ） ｅｕ ［］ Ｃ ｒ ｍ ｓ ｍ ｅｅｒｈ，０ ４，２：９０ Ｌ． Ｂ ａ ｖ Ｊ ． ｈｏ ｏｏ ｅＲ ｓａｃ ２ ０ １ ３ ７４ ３．

２， Ｄ 是最 常 用 和 最 有 效 的 植 物 激 素 之 一， ４  其浓度在 １． ０～３． ｍ ·Ｌ－１ 下 对 胚 性 愈 伤 组 织 ０ ｇ
１ ８ ４ 的形成起关键作 用 ［６１ ］。Ｖ ｇｌ等 ［ ］在 研 究 二 倍 ｏｅ

其在 １． ｍ ·Ｌ ２， Ｄ 体短柄草 Ｂ ２ 时发现， ｄ１ ０ ｇ ４  －１ 和 ０．２ｍ ·Ｌ ６Ｂ 对于诱导胚性愈伤组织效 ２ ｇ Ａ
－１

果最好。本研究表明， 在继代培养下， ， Ｄ 和 ６ ２４   Ｂ 浓度分别为１． ｇ Ｌ－１ 和０． ｇ Ｌ－１ 时， Ａ ０ｍ · ２ｍ · 短柄草愈伤组织形成较好并能维持其胚性状态。
［］ Ｂ ｂａ 等 ４ 研 究 发 现， ０ ｍ · Ｌ－１６Ｂ ａｌｋ ２．３ ｇ Ａ

使短柄草分化率最高可达 １ ０％ ； ｏ ｅ 等 ［ ］报道 ０ Ｖ ｇｌ ４ 在 ０．３ｍ ·Ｌ－１ ＫＴ 下， 短柄草 １ 个 基 因 型 分 ２ ｇ ９ 化率为 ０～９ 。本试验结果表明， ２ｍ ·Ｌ－１ ４％ ０． ｇ ＫＴ 或 ０． ５～１． ｇ Ｌ－１  Ａ 下二 倍体和 六倍 ０ｍ · ６Ｂ 体短柄草分化率较高， 最高为 Ａ Ｒ （４．２％ ） 与 Ｂ ６６ １ 且 Ａ Ｒ ０ （１．５％ ） ＫＴ 效 果 较 ６Ｂ 好， Ｂ Ｂ １２７ ２ Ａ ６ Ａ  浓度越高褐化现 象 越 严 重， 分 化 率 没 有 明 显 提 且 高。Ａ Ｒ ０ 分化 效 果 比 Ａ Ｒ 高， 能 是 由 于 可 Ｂ １２ Ｂ６ 染色体组倍 性 不 同 引 起。 基 于 上 述 研 究， 试 验 本 对分化 条 件 继 续 优 化 发 现， １ ｍ ·Ｌ－１ Ｋ 与 ０． ｇ Ｔ ０． ｇ·Ｌ－１６Ｂ 组 合 后 能 提 高 短 柄 草 的 分 化 ５ｍ Ａ 率， 最高可达 ９ （ Ｂ １ ２ 以上。 ０％ Ａ Ｒ ０ ）
［１］ Ｂ ｂａｋ 等 １ 在再生 培 养 基 中 补 充 ＮＡＡ 与 ａｌｃ 结 三 ６Ｂ 来诱导短柄草 绿 芽 生 根， 果 发 现， 种 生 Ａ

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